本發明提供了一種檢測活體植物細胞中兩種膜蛋白共定位程度的方法。具體步驟為:(1)使植物中共表達如下兩種融合蛋白,以獲得對待測兩種蛋白進行了雙色標記的植物材料:熒光蛋白A標記的待測蛋白A,熒光蛋白B標記的待測蛋白B,熒光蛋白A與熒光蛋白B發不同顏色的熒光;(2)用可變角全內反射熒光顯微鏡對待測植物材料進行觀察,獲得雙通道圖像;(3)用ImageJ軟件將所得雙通道圖像保存為無損壓縮的TIFF格式,然后在PPA軟件中對兩個圖像進行校準,再用中值濾波對圖像進行去背景處理,最后通過雙高斯擬合計算待測蛋白A和待測蛋白B的接近指數,從而得到待測蛋白A和待測蛋白B的共定位程度。本發明獲得兩種膜蛋白共定位程度的方法簡單、重復性好,避免了細胞內部熒光信號的干擾,并且獲得的數值具有明確的生物學意義。
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