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脲酶米氏常數測定方法

728   編輯:管理員   來源:中冶有色網  
2023-03-19 07:28:46
本發明涉及一種脲酶米氏常數測試方法即脲酶-酚紅法,屬于生物化學和應用酶學技術領域。本發明所提供的測試方法是以一系列不同濃度的尿素溶液為底物,酚紅為指示劑,在脲酶的作用下,尿素分解產氨,pH值上升,在酚紅指示劑的作用下,體系的顏色變深,吸光度增加,用分光光度計或酶標儀測吸光度。酶促反應速率與吸光度值的增加成正比,因此可以用吸光度增加值的倒數1/△A代替雙倒數方程1/V=Km/(Vmax[S])+1/Vmax中的1/V,對底物尿素濃度的倒數1/[S]作圖,根據雙倒數方程可得直線在X軸上的截距即為-1/Km,求得Km值。
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