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在干細胞中進行基因定向敲入的方法

1186   編輯：管理員   來源：中冶有色網  
2023-03-19 08:56:56
本公開提供了一種在干細胞中進行基因定向敲入的方法，該方法包括如下步驟：S1、將針對待敲入的靶位點的經化學修飾的sgRNA和Cas9蛋白混合以形成RNP復合物；S2、形成待轉染AAV病毒顆粒；S3、將干細胞的懸液與所述RNP復合物的懸液混合并進行電轉，得到電轉后的培養物；S4、向所述電轉后的物料中加入待轉染的AAV病毒顆粒的懸液以進行的轉染，得到轉染后的培養物；S5、將所述轉染后的培養物極限稀釋后進行單克隆化培養，通過PCR及測序并篩選出進行了基因定向敲入的單克隆細胞株。通過上述技術方案，本發明建立了一種無需篩選標記，可顯著提高大片段基因敲入干細胞效率的技術方案。
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聲明：
“在干細胞中進行基因定向敲入的方法” 該技術專利(論文)所有權利歸屬于技術(論文)所有人。僅供學習研究，如用于商業用途，請聯系該技術所有人。
我是此專利(論文)的發明人(作者)
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