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快速比較未純化融合酶及其突變體比活性的方法

797   編輯：管理員   來源：中冶有色網  
2023-03-19 08:14:37
一種快速比較未純化融合酶及其突變體比活性的方法，(1)用寡聚組氨酸或類似標簽融合表達酶及其突變體，制備誘導表達細胞裂解液為未純化融合酶樣品；(2)固定化抗標簽單抗或其它親和分離介質；(3)所有測定中所用固定化親和分離介質的結合容量相同；(4)用來自相同未純化融合酶樣品的不同總蛋白量與固定化親和分離介質反應，分離結合的融合酶測定其活性，獲得結合的融合酶活性對反應體系總蛋白量的響應曲線；(5)據親和反應的化學計量學建立上述響應的數學模型，用單抗為親和分離介質時所用融合酶遠多于固定化單抗結合容量而適用簡化模型，用Ni2+-NTA需用非簡化模型，預測結合的融合酶最大活性作為比活性的等效量進行比較。
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