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均相定量比較未純化酶及其突變體比活性的方法

1026   編輯：管理員   來源：中冶有色網  
2023-03-19 07:55:18
一種均相定量比較未純化酶及其突變體比活性的方法，涉及如下步驟：重組表達需比較比活性的起始酶及其突變體；超聲、化學裂解或凍融裂解宿主細胞，離心上清液用0.22μm濾膜過濾后的濾液為樣品；用純化后起始酶或某個突變體為免疫原，免疫哺乳動物所得抗血清為多抗；用聚乙二醇促進免疫復合物形成，測定樣品和多抗反應混合物在310到410nm間某波長下光密度與630到800nm間某波長下光密度之差為檢測信號，用前述免疫原為參考品建立選擇性測定樣品中起始酶及其突變體蛋白量的免疫比濁法；用此免疫比濁法均相測定樣品中起始酶或其突變體的蛋白量，據樣品中酶活性換算成比活性用于排序或計算相對值進行比較。此方法效率高且不依賴于融合標簽表達酶及其突變體。
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