本發明涉及一種檢測凝血酶用生物電化學傳感器其制備方法及應用。該傳感器為三電極體系傳感器,其中對電極為鉑電極,參比電極為飽和甘汞電極,工作電極為功能化修飾的熱解石墨電極,該功能化修飾的熱解石墨電極是在熱解石墨電極表面依次修飾有聚(二烯丙基二甲基氯化銨)、金納米顆粒、葫蘆[7]脲和循環混合液;所述的循環混合液中含有:100nMMB標記的探針DNA鏈、1nM延伸DNA鏈、1nM的凝血酶適體鏈、1.6unit/μL的T4DNA連接酶和0.4unit/μL的ExoIII。本發明利用凝血酶與適體的特異性結合能力,同時,借助連接酶輔助作用引發ExoIII的循環切割反應,并結合電化學快速靈敏的檢測優勢實現對凝血酶的高靈敏性檢測。
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