本發明公開了一種化學標記結合LC?MS的方法及其在核苷酸分析中的應用。本發明使用N,N?二甲基對苯二胺(DMPA)對包括兩種甲基化修飾的核苷酸在內的10種單磷酸核苷酸進行化學標記,在顯著改善了這些修飾核苷酸在反相液相色譜中的保留行為的同時,也極大地提高了它們在質譜中的檢測靈敏度。該方法靈敏度高、選擇性高,可利用液液萃取有效除去過量標記試劑DMPA,可利用Strata?X固相萃取小柱除去過量的活化劑EDC,可以定量檢測生物體中極低豐度的甲基化修飾的胞嘧啶核苷酸,可顯著改善核苷酸在LC中的分離以及其在ESI?MS檢測靈敏度,使其信號響應提高1?2個數量級。
聲明:
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