本發明公開了一種消除交叉污染的閉管可視化PCR檢測方法。在PCR反應之前利用Cas12a蛋白的順式切割活性特異性地破壞管底的交叉污染物;利用PCR反應使管底的Cas12a蛋白變性,消除其對PCR反應的抑制作用,獲得擴增產物;利用海藻糖對提高Cas12a蛋白熱穩定性的作用、礦物油隔熱的作用和PCR儀器的管蓋控溫的作用,防止管蓋上的Cas12a蛋白失活,從而利用其反式切割活性特異性地檢測擴增產物,實現了交叉污染消除、PCR擴增和熒光可視化檢測的閉管聯用。該方法具有特異性強、準確性高、操作及引物、crRNA、探針序列設計簡單、閉管操作、高效消除交叉污染的特點,為核酸定性分析提供了新的途徑。
聲明:
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