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L-半胱氨酸轉運蛋白突變體及其在生產L半胱氨酸中的應用

1005   編輯：管理員   來源：中冶有色網  
2023-03-19 08:57:04
本發明涉及一種L?半胱氨酸轉運蛋白突變體制備方法，其方法步驟包括：⑴A31V突變體的獲得，以SEQIDNO.2核苷酸序列為模板，SEQIDNO.3、SEQIDNO.4為引物，進行PCR得到的突變體基因eamBA31V；⑵將突變體基因eamBA31V與PMW118質粒分別用EcorI,XbaI雙酶切，酶切產物純化后用T4連接酶22℃連接12小時，連接產物用化學轉化法轉化DH5α感受態細胞，涂布于含氨芐氯霉素的LB固體平板上，37℃過夜培養；⑶對固體培養基上長出的單菌落用PMW118通用引物M13F、M13R進行菌落PCR，將PCR產物測序，驗證正確的單菌落擴大培養，提取質粒PMW118?eamB?A31V。本發明同時將L?半胱氨酸轉運蛋白突變體應用于產L?半胱氨酸大腸桿菌工程菌株，可使大腸桿菌對L?半胱氨酸耐受性提高1.78倍，L?半胱氨酸產量提高18％。
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