本發明提供了一種應用于核酸擴增實時電化學pH檢測的反應體系及檢測方法。所述反應體系為恒溫擴增反應體系,含有引物、反應液、DNA聚合酶、和待檢DNA;所述反應體系中的反應液含有TritonX-100、dNTP、甜菜堿、Mg2+、K+與NH4+,反應體系的反應液中有額外添加的OH-。本發明具有以下特點,本發明是利用對pH敏感的電化學傳感器對核酸擴增進行實時檢測:對于陰性樣本,擴增反應過程中由于不產生質子因此反應前后pH無變化,而對于陽性樣本,隨擴增反應進行,氫離子作為副產物不斷產生,因此反應前后pH發生變化;該反應液能夠替代普通核酸擴增的反應緩沖液,不僅能保證核酸擴增正常進行,且對擴增過程中氫離子的產生足夠敏感,產生明顯的pH變化。
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