本發明公開了一種有效表達色氨酸合成酶的新型表達載體及其應用,其表達載體構建步驟為:一、以大腸桿菌K?12為模板PCR擴增trpBA基因,純化后連接到pCold?I載體上,得到重組質粒trpBA?pCold?I,二、設計引物P敲除lacO?F/P敲除lacO?R,以trpBA?pCold?I質粒為模板進行全質粒PCR,產物經Dpn?I處理后轉化大腸桿菌,再進行質粒擴增、培養、測序,得到敲除lacO序列的新重組質粒,再對新重組質粒的cspA啟動子進行隨機突變并轉化大腸桿菌經擴增、培養、測序、篩選得到有效表達色氨酸合成酶的新型表達載體。該方法能夠避免化學誘導劑的使用,不需要調整發酵溫度,從而有效降低色氨酸合成酶的生產成本,且為進一步研究啟動子對基因表達的影響提供了理論基礎。
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