本發明公開了一種人羊膜間充質干細胞的分離純化及鑒定方法,hAMSCs的分離方法為將人羊膜剪成碎片,用EDTA的胰蛋白酶,DNaseI的膠原酶分二步旋轉消化,用鋼網過濾,收集細胞濾液即為分離的原始hAMSCs;hAMSCs的純化方法是原始hAMSCs用LG-DMEM培養基置于CO2培養箱培養,在倒置顯微鏡下除去完全未貼壁生長的羊膜上皮細胞,第3天更換新的培養基,待細胞匯合度達80~90%后,用胰蛋白酶—EDTA溶液消化收集細胞即可獲得高純度的hAMSCs;hAMSCs的鑒定方法采用免疫細胞化學染色波形蛋白和CK19以鑒別hAMSCs和羊膜上皮細胞,采用流式細胞術檢測CD29、CD44、CD166、CD34和CD45的表達。本發明方法具有hAMSCs高收率、高活性、高純度優點,鑒定方法簡便、精準。
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