本發明公開了一種絕對定量細胞內DNA雙鏈斷裂數量的方法及應用。該方法將帶有末端修飾的外源核苷酸片段插入至固定細胞基因組DNA雙鏈斷裂處,然后將基因組片段化并連接銜接接頭,針對外源核苷酸片段和銜接接頭設計特異性PCR引物和特異性熒光探針,結合細胞內參基因,構建數字液滴PCR體系,定量細胞內DNA雙鏈斷裂數量。本發明使得檢測DNA雙鏈斷裂擺脫了序列依賴性,廣泛適用于絕對精準定量動植物內因疾病、輻射、藥物或者基因編輯等各種原因造成的DNA雙鏈斷裂數量,可用作檢測射線損傷、化學藥物損傷、基因編輯脫靶效率等問題的有效工具,在分子生物學和臨床診斷中具有非常廣闊的應用前景。
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